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乳制品卫生难检测?普敦科技携新技术应策!

发布时间:2022-08-29浏览:157

关键词

乳制品、氯霉素、固相萃取、磁性固相萃取、液相色谱质谱、LC-MS、SPE、mSPE

 

前言

氯霉素诞生于上世纪中期。是第一种通过化学合成方法大量生产的抗生素。由于其广谱性,且成本低廉易于生产而被广泛应用,特别是医疗体系较为落后的第三世界国家。不幸的是,氯霉素也被发现有明显的不良反应,主要表现为对骨髓造血机能的抑制而引起的贫血和白血病等。因此,目前临床上对其使用有着严格的限制。与此同时,由于其通过食物链累积和传递的影响,也在畜牧和水产饲养中被禁用。

 

氯霉素(CAS. 56-75-7)

 

目前,动物源性食品中氯霉素的提取和净化过程较为复杂。例如《食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留的测定 液相色谱-串联质谱法》(GB 29688-2013)中规定,牛奶中氯霉素残留应以乙酸乙酯提取,并经正己烷脱脂和C18柱SPE净化。其过程繁琐且有毒有害试剂用量较大。

 

本文所述方法,仅通过简单的蛋白质沉淀和磁性固相萃取净化,且无需氮吹浓缩即可实现检测。磁性固相萃取(mSPE)是将传统固相萃取材料磁化,形成磁性分散萃取剂,结合全自动提取设备,无需全程人工操作,实现了一键运行、无人值守。相对于经典的固相萃取(SPE),该方法自动化程度高、简单高效、成本低廉,适合广泛推广。

 

AUTO M32是第一代自动化磁性萃取系统,结构简单、运行高效,结合方法学优化,最大上样体积可达3mL。适用于临床小分子疾病标志物、食品安全和法医毒物检测。

 

MagicFlux 1000是一种基于mSPE技术的全新自动磁性固相萃取系统,可于30分钟内全自动处理最多二十个样品,每个样品的上样体积可达10mL。适用于食品安全、法医、环境污染物检测等多个领域中的样品净化。该系统使用10寸平板电脑,基于Windows10 操作系统和专用的软件,从移液、提取、输出样品完全自动化操作。

 

AUTO M32

全自动提取系统

MagicFlux 1000

全自动磁性固相萃取系统

 

实验过程

标准曲线配置

30%甲醇水配制浓度为0.4、1、2、5、10、20ng/mL氯霉素标准溶液,相当于原始样品中氯霉素残留量0.08、0.2、0.4、1、2、4μg/Kg。

 

样品处理

孔位

名称

加入液体

体积μL

振荡搅拌时间s

静置吸磁时间s

17)

活化

600

60

30

2(8)

上样

上样溶液

1000

60

30

3(9)

上样

上样溶液

1000

60

30

4(10)

上样

上样溶液

1000

60

30

511)

淋洗

600

60

30

612)

洗脱

60%乙腈

200

80

30

1

排废

/

600

10

0

 

方法二,将上一步完成离心后的15mLPP试管直接放入MagicFlux 1000全自动磁性固相萃取系统的上样位。参考上表在各溶剂位放入对应的溶剂,并设定运行程序。执行mSPE操作。

注:测试样品,准确称取2.00g牛奶,加入2.0μL的200ng/mL氯霉素标准溶液,相当于0.2μg/Kg加入20 mL D5-CAP(200ng/mL)同位素标记标准溶液如上所述进行提取和分析。

 

实验数据

如下图所示,本方法定量下限为0.4ng/mL(相当于牛奶中0.08μg/Kg)。可以看到各MRM通道的氯霉素色谱峰信号稳定清晰。

 

0.4ng/mL(相当于牛奶中0.08μg/Kg)MRM色谱图

 

下图为测试样品(0.2μg/Kg)色谱图。该样品的氯霉素含量相当于《食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留的测定 液相色谱-串联质谱法》(GB 29688-2013)所规定的定量下限。可以认为LC-MS结合磁性固相萃取法的整体灵敏度比上述标准方法提高了约2.5倍。

牛奶中添加0.2μg/Kg样品MRM色谱图

 

如下表所示,牛奶中添加0.2μg/Kg样品,准确度(添加回收率)为90.9~116%,相对标准偏差为10.1%。

名称

峰高

峰面积

计算浓度(μg/Kg)

准确度(%)

测试样品1

1710

4890

0.231

116

测试样品2

1740

4630

0.22

110

测试样品3

1390

3780

0.182

90.9

测试样品4

1480

4320

0.206

103

平均值

 

 

0.21(RSD10.1%)

105

 

如下表,标准曲线各点的准确度为97.6~104.5,精密度为0.8~7.3%

序号

浓度ng/mL

平均峰面积

RSD%(n=2)

准确度%

1

0.08

1540

7.3

104.5

2

0.2

4090

5.5

97.7

3

0.4

8710

3.7

99.6

4

1

22100

5.8

98.9

5

2

44000

5.1

97.6

6

4

92000

0.8

101.5

 

下图为定量MRM通道的氯霉素色谱峰标准曲线。

氯霉素标准曲线

 

结果与讨论

综上数据可以看出,使用HLB磁性萃取剂,结合AUTO M32全自动萃取仪或MagicFlux 1000全自动磁性固相萃取仪,提取和净化牛奶中的氯霉素。经LC-MS/MS分析测试,线性良好,结果准确精密,符合基本定量测试的方法学要求。同时,磁性固相萃取技术(mSPE)结合全自动提取系统AUTO M32或MagicFlux 1000,大幅度减少传统SPE的移液操作和人为实时监测,节约了人力成本,并显著降低人为因素在前处理中的影响。

 

 

欢迎致电4001-520-260,联系普敦实验室设备(上海)有限公司。

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